我用Qiagen

我用华舜和TAKARA的胶回收试剂盒，效果还可以，只是价格上有点贵，不知道哪还有便宜点的盒子？ em17:

??QIA的胶回收很好用啊,是不是没选对?

哦，那我没用过！

我也用过QIAGEN的大提试剂盒（离子交换柱），效果很好呀。
其中：
1. 硅胶吸附方式提取的快！但是纯度不高，尤其是内毒素残留，所以，硅胶吸附的质粒只适用于普通的分子生物学操作。但通常大提的是为了上动物实验（核酸免疫或治疗用），所以适用离子交换方式来纯化质粒，时间是长点，但质粒的质量好。很多超纯试剂盒（2倍以上于CsCl离心纯度）也是用这中方法。
2. 若普通的分子生物学操作，用硅胶吸附式的就好。
3. 找找原因，试剂盒问题的可能性不大，看看自己的操作。

泽发生物在2004-6-8 11:36:00说道：[br]用硅胶吸附方式 如果担心内毒素残的话 可以在洗脱时用无菌管装 并且再用酒精沉淀

哈哈，八仙过海，各显神通！所以说我们劳动人民是最聪明的。

但从治学的角度出发还是支持bio-equation

我在实验室用的是V-GENE的超纯大提，效果很好，你可以试试。
V-GENE也有无内毒素的大提，也非常好，据我了解都是出口到美国的。
V-GENE的大提是膜结合，纯度非常高。

还有，用注射器做的话，用负压吸会轻松很多，可以试试。

现在我们实验室不论做小抽还是大抽，或96的用的都是负压。大大缩短了实验的时间，而且现在的负压装置很多是可以高压灭菌的。有些公司的KIT里还配连接管，做RNA非常不错

老外设计试剂盒时有时考虑问题不一定很充分，而且是针对一次使用设计的。针对试剂盒提供的使用说明，最好结合具体实验情况做一下改进，做起实验来就会容易多了。我用过的Qiagen的最大的柱子是Qiagen tip-10000, 即提取10mg质粒规模的。

对于小的柱子，操作起来比较容易，如Tip-20一般第一次使用，基本上是可以靠重力进行各溶液的操作的，为了加快实验进度，可以考虑适当加压，尤其在用QC洗这一步没有必要在傻等溶液流下。Qiagen柱子的个体之间会有些差异的，有的柱子可能添料装得紧些，流速就会有差别。

对于大柱子，如tip-2500以上的，Qiagen提供的使用方法需要改进。大柱子所用的菌液会很多，裂解后上清如果能够进行一轮离心会好一些的。致于上清用注射器什么的进行过滤，根本不现实，菌液如果裂解不合适的话，会比较粘的，根本不能过滤。离心的话问题就不大了。而且大体积的上清，其中的蛋白等杂质还是很多的，我通常采取一步上清高温煮的方法，可以去掉大部分的蛋白类杂质，后面过柱子就容易多了。不用担心这一步会损伤质粒，许多96孔板提取质粒都是要煮的。


Qiagen柱子提取质粒的质量还是非常高的，比起CsCl离心法要容易得多，所得质粒质量也足够。望各位在使用Qiagen 柱子时将使用经验拿出来一起分享。

我们公司的超纯Kit(v-gene)也挺好用的 如果各位有兴趣可以小量试用.得率肯定不会比老外得东西差 另外我们还有做内毒素超纯得kit,可以完全去除内毒素.张超 电话:13601969785 Emailashzhang@hotmail.com

在国内的时候， 就知道QIAGEN贵得要命，到了美国总算有机会用了，
结果：用胶回收试剂盒，玻璃奶，产率很低，
大提质粒更是没有办法用， 第一是耗时长， 因为QIA是使用离子交换得原理，过柱不能离心，只能慢慢滴，等死人了，第二是管子容易堵，也是硅胶层太厚，裂解后中和，然后离心，QIA说可以用它的过滤管子，结果我的印度同学，可怜的用手拼命的按注射器，也推不动， 因为那管子很容易堵。第三，大提质粒后，洗完， 最后溶解的质粒液体总是不清亮，一离心，竟然可以离下白白的一堆东西（沉淀），真不知道是什么东西，只好取上清用， 损失惨重，第4，不是洗脱液下来直接用， 必须用乙醇沉淀，洗盐，等乙醇干， 费时，而且掌握不好， 干了不溶解，湿了又影响后面的反应， 不如硅胶膜吸附的原理的试剂盒好。 注意：以上不是偶然现象， 提了几次都这样， 最后，气疯了， 买了几个小提柱子提了去测序，发誓做不出实验，最后才会试用QIAGEN.以上为各人经验， 给大家提醒一下， 不要迷信。
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哈哈， 查文献的时候偶然看到了这段话， 恰好证明我所言不虚，请看下面的节录，
Commercially available Qiagen and Clontech kits only produced DNA yields of 1-2 milligrams/liter of culture media. In addition, the Qiagen isolation kit often produced a white precipitate would co-purify with the DNA raising questions related to vector purity.

DNA was tested that was isolated using a new published procedure in which yields of >2-4 milligrams of DNA from 200 milliliters of initial bacterial culture could be obtained (Templeton et al., 1997). Once DNA was isolated using this new procedure, transduction was again examined on the same 4 cell lines.

大意就是他在做转染时用QIAGEN，clontech 等商品化KIT时，产量低(1-2mg/L)， 此外，QIAGEN呢，还会有白色沉淀和DNA混杂在一起，这样就影响了纯度。 作者建议用一篇1997年的新方法来提取， 产量高。2-4mg /200ml

从以上的引文和我的经验大家可以很明确的得出结论，qiagen的大提试剂盒出现白色沉淀是一个和操作无关的， 是试剂盒本身的缺陷。 em6: em6: em6: em6:

em18:

现在国内有MN的试剂盒，如果你用过Clontech的试剂盒应该可以看见里面有的东西上面有MN的字样，Clontech是MN的OEM，针对于大提的试剂盒，MN比QIAGEN要省时，离子交换也做了改进，更适合大片断的结合，价格比QIAGEN便宜5％-10％去内毒素的专用盒子达到0.05EU/ug并且对于楼主所说的管子容易堵MN也做了相应的措施，使用滤纸和泵（按片断区分）至于纯度和产量等问题，请咨询MN国内的代理：北京清源公司
010-51177250/010-51177251

我们实验室也买了Qiagen的小提试剂盒，还没有用，不知效果怎样，看来下次要注意了哦。
不过我用过Qiagen的pDrive pcr cloing Vector，效果也倒不错的，假阳性不多。